Le cytomètre en flux analyseur
Le cytomètre MACSQuant® VYB (Miltenyi Biotec) permet une caractérisation individuelle des propriétés optiques de fluorescence de cellules en suspension.
Cet appareil vient d’être acquis par TWB pour compléter l’offre de service « cytométrie en flux ». Il est situé sur le plateau Biotransformation & culture, sous la responsabilité de Delphine LESTRADE. Le cytomètre en flux MACSQuant® VYB (Miltenyi Biotec) est un
cytomètre-analyseur permettant une caractérisation individuelle, quantitative et qualitative, des propriétés optiques de fluorescence de cellules en suspension: cellules microbiennes et d’eucaryotes inférieurs ou microalgues par exemple. C’est un instrument automatisé, équipé d’un passeur d’échantillons, qui
peut analyser jusqu’à 10 000 évènements par seconde. La technique de cytométrie en flux permet de faire défiler des cellules à grande vitesse. Chaque particule peut être excitée par un ou plusieurs lasers. De nombreux détecteurs placés à différents angles fournissent des informations en termes de taille, de structure et de contenu fluorescent pour chaque cellule.
Le MACSQuant VYB est équipé de trois lasers monochromatiques d’excitation, de dix canaux optiques de détectionet d'un logiciel intuitif pour faciliter une analyse cellulaire rapide et simple. Cet instrument est polyvalent pour des
analyses phénotypiques et/ou fonctionnelles utilisant des rapporteurs fluorescentstels que les colorants de type « dyes », les protéines fluorescentes ou des anticorps couplés à des fluorochromes. Il est configuré avec un laser de 561 nm pour une analyse améliorée et plus sensible des protéines fluorescentes situées dans la gamme d'excitation jaune / vert. La plate-forme « passeur d’échantillons » est automatisée et flexible permettant ainsi l’analyse séquentielle d’échantillons conditionnés en tube 5 mL, 15 mL ou 50mL mais aussi en plaque 96 puits. L’injection de l’échantillon se fait par l’intermédiaire d’une seringue Hamilton de 500 mL. Le volume d’échantillon analysé étant connu avec précision, il est donc possible d’obtenir un
dénombrement des différentes populations cellulairesobservées. Le rendu de concentration sera donné en nombre de cellules par mL avec une précision de +/- 2%.
Le cytomètre analyseur MACSQuant VYB (Miltenyi Biotec) (Crédits : TWB / B. Hamousin)
Les caractéristiques du cytomètre MACSQuant VYB sont :
- 3 lasers monochromatiques : 405, 488 et 561nm
- 10 canaux de détection : dont 2 relatifs à la taille (FSC) et complexité cellulaire (SSC) + 8 dédiés à la détection des fluorescences (voir schéma optique Fig 1 ci-dessous)
- Volume minimum d’analyse : 25µL
- résolution : 0.5 µm
Il est possible
- d’utiliser le passeur d’échantillons pour une analyse entièrement automatisée (passeur de tubes 5 ml ; 15ml ; 50ml et passeur de plaque 96 puits)
- de réaliser un marquage avec gestion des incubations avant l’analyse et utilisant jusqu’à 4 réactifs différents
- de maintenir une température d’analyse à 4°C pendant 4h
- d’analyser des cellules de taille comprise entre 0.5 µm et 150 µm.
Exemples d’applications-types
- Numération directe des microorganismes
- Détection et dénombrement de microorganismes viables, viables mais non-cultivables et morts
- Quantification des gènes reporter
- Caractérisation des données physiologiques : pH intracellulaire, stress oxydatif, fluidité membranaire, charge énergétique, potentiel membranaire.
- Analyse fine des catalyseurs microbiens pour l’amélioration des procédés
- Criblage de banque cellulaire
- Bilan des populations dans consortia microbiens.
Figure 1 : Schéma du banc optique de détection des fluorescences du MACSQuant VYB (Miltenyi Biotec)
Contact : Delphine Lestrade, Responsable cytométrie TWB (delphine.lestrade@inra.fr)
