Le système d’analyse SEC/MALS
Le système SEC/MALS permet de
déterminer la masse molaire absolue de polymères en solution. Il associe une chaîne HPLC permettant de faire de la chromatographie d’exclusion de taille (SEC ou GPC) et deux détecteurs : un détecteur à diffusion de lumière statique multi-angles (MALS) et un réfractomètre différentiel (RI).
La chaîne HPLC fonctionne en isocratique et permet en choisissant les colonnes adaptées (solvants, gamme de masse molaire) de séparer les molécules suivant leur taille (sans interaction avec la matrice de la colonne). En sortie de colonne, deux détecteurs analysent les composés :
- Le réfractomètre (RI) sert de détecteur de concentration.
- Le détecteur à diffusion de lumière statique (MALS) permet la détermination des masses molaires et de la taille (rayon de giration) des macromolécules en solution (protéines, polymères naturels et synthétiques). L’avantage de cette technique est une détermination absolue des masses molaires, c’est-à-dire sans calibration préalable avec des standards. Le nombre élevé d’angles de mesure (18 angles) autorise l’étude sur une gamme étendue de masse molaire (103 à 109 g/mol) et de taille (10 à 500 nm).
Le système est adapté pour évaluer la distribution de taille au sein d’un polymère et sa polydispersité. Il peut également renseigner sur l’oligomérisation et l’agrégation des protéines. (cf.
http://www.wyatt.com/library/application-notespour les applications) Le système étant installé sous une sorbonne, il est possible de travailler en phase aqueuse ou en solvants organiques divers en toute sécurité.
Caractéristiques principales de la chaîne chromatographique
- Marque : Shimadzu
- Pompe isocratique avec dégazeur en ligne
- Injecteur/passeur d’échantillons : contrôle de la température (4 – 40°C), boucle de 500 µl, capacité de 70 vials de 1,5 ml
- Four colonne : (Tamb-10°C) à 85°C, capacité de 6 colonnes de 300 mm
Caractéristiques principales des détecteurs
- Marque : Wyatt
- MALS (Dawn Heleos II) : 18 angles, laser à 658 nm
- réfractomètre (Optilab T-rEX) : thermostaté (4 – 50°C), 658 nm
- Système annexe de recyclage automatique des solvants en sortie des détecteurs (hors analyses)
