La chaîne U-HPLC 1290 Infinity (Agilent)
TWB a développé le dosage d’acides aminés sur cet équipement de chromatographie en phase liquide à ultra-haute performance. La méthode d’analyse permet de séparer jusqu’à 21 acides aminés en 12 min.
Le plateau Analytique de TWB possède une chaîne U-HPLC 1290 Infinity (Agilent) depuis novembre 2014. La chaîne est équipée du nouveau passeur d’échantillon d’Agilent, le « 1290 Infinity Multisampler » qui a une grande capacité (jusqu’à 10 micro-plaques dans la configuration installée à TWB), et de deux détecteurs (détecteur UV à barette de diode (DAD) et détecteur fluorimétrique).
Cet équipement va notamment être dédié au dosage d’acides aminés. Cette prestation permettant de déterminer la quantité de différents acides aminés dans un échantillon liquide a de multiples applications : simple dosage dans des échantillons divers, suivi de la consommation d’acides aminés lors de la culture de micro-organismes, bilan de matière lors de fermentation, identification et suivi de la production de molécules de type acide aminé…
La méthode d’analyse est issue d’une note d’application d’Agilent (ref. 5990-4547EN).
L’échantillon subit préalablement à sa séparation chromatographique une dérivatisation chimique avec l’OPA (pour les acides aminés primaires) et le FMOC (pour les acides aminés secondaires), ce qui permet de meilleures rétention et séparation en chromatographie en phase inverse et une détection plus sensible en fluorimétrie et en UV à des longueurs d’onde spécifiques. La dérivatisation chimique devant être effectuée extemporanément avant injection dans la colonne chromatographique, le passeur d’échantillons est programmé afin de réaliser cela en ligne à partir du prélèvement dans le vial d’injection (0,5 µl).
Les composés sont ensuite séparés sur une colonne C18 selon un gradient entre 2 éluants.
En sortie de colonne, deux modes de détection sont utilisés en série : la détection UV à 2 longueurs d’onde et la fluorimétrie ce qui permet de travailler dans une large gamme de concentrations allant de 0,01 à 1 mM pour chaque acide aminé.
Contact : Isabelle DUFAU (isabelle.dufau@toulouse.inra.fr)
Exemple d’un chromatogramme :
